SHSY-5Y (nöroblastoma) ve l929 (fibroblast) hücre hatlarında theranekronun entegre stres yanıtı üzerindeki etkisinin İn Vitro olarak incelenmesi

Abstract

Nöroblastoma, genellikle bebeklik ve erken çocukluk döneminde görülen, nöral krest hücrelerinden kaynaklanan sempatik sinir sistemi kaynaklı solid bir tümördür. L929, insan fibroblastlarından elde edilen normal bir hücre hattı olarak kullanılmaktadır. Çalışmalarda genellikle ilaca bağlı toksisitenin varlığı için kullanılmıştır. Entegre stres yanıtı(ISR), bir dizi fizyolojik değişiklik ve farklı patolojik koşullara karşı gelişen bir sinyal yoludur. Vücuttaki çeşitli besin yoksunluğu, hipoksi, virüs enfeksiyonu, oksidatif stres gibi koşullara karşı üç farklı kinaz olan; PERK, PKR, GCN-2 ile yapmaktadır. Theranekron, 'Tarantula Cubensis' örümceğinden hazırlanan; nörotoksik etkilerinin yanı sıra hücre rejenerasyonu ve hemolitik enzim inhibe edici aktivitelere sahip peptitlere sahip bir ajandır. Bu çalışmada, literatürde ilk kez Nöroblastoma ve fibroblastik hücrelerde potansiyel anti-kanser özellikleri entegre stres sinyal yolağı üzerinden Theranekron uygulaması ile araştırılmıştır. SHSY-5Y ve L929 hücre hatları çoğaltılmıştır. Theranekron için doz belirlemesi MTT testi ile yapılmış ve IC50 değeri 1/10 olarak belirlenmiştir. Etkin doz %90 konfluensiye gelmiş iki hücre hattı içinde 24 saat uygulandı. PERK, PKR, GCN-2 entegre stres markırları ile immünohistokimyasal olarak her iki hücre hattı boyandı. Apoptoz için Tunel ile değerlendirildi. İstatiksel olarak gruplar arası karşılaşmalar yapıldı. Theranekron uygulaması SHSY-5Y kanser hücre hattında kullanılan antikorlar immünoreaktivitesini arttırırken uygulama yapılmayan kanser hücre hattında bunun azaldığı istatiksel olarak anlamlı bulundu. L929 açısından ilaçlı gruplarda bu üç immünoreaktivitenin ilaçsız yani kontrol L929 a göre azaldığı istatiksel olarak anlamlı bulundu. Tunel boyamalarında SHSY-5Y nöroblastoma kanser hücre hattı için özellikle ilaçlı grupta hücre ölümü artarken L929 ilaçlı grubunda hücre ölümünün az bir ifadeyle olduğu izlendi. Yani theranekron etkisini entegre stres moleküllerini kanserde arttırarak ölüme götürdüğü fakat normal vücut hücrelerinde theranekronun göz ardı edilebilir bir etkisi olduğu anlaşıldı. Buna bağlı olarak belli dozlarda kanserlerde ilaç olarak kullanılabileceği gerçeğini öne çıkardı. Theranekronla ilgili çalışmaların azlığı göz önüne alındığında çalışmamızın iyi bir referans olabileceğini öngörmekteyiz. Anahtar Kelimeler: Apoptoz, Entegre stres yanıt, Kanser, PERK, Theranekron

Neuroblastoma is a solid tumor originating from the sympathetic nervous system originating from neural crest cells, usually seen in infancy and early childhood. L929 is used as a normal cell line derived from human fibroblasts. It has often been used in studies for the presence of drug-related toxicity. The integrated stress response(ISR) is a signaling pathway that develops against a number of physiological changes and different pathological conditions. There are three different kinases that are used against various conditions in the body such as nutrient deprivation, hypoxia, virus infection, oxidative stress; It is performed with PERK, PKR, GCN-2. Theranekron is an agent prepared from the spider 'Tarantula Cubensis'; it has peptides with neurotoxic effects as well as cell regeneration and hemolytic enzyme inhibitory activities. In this study, for the first time in the literature, potential anti-cancer properties in neuroblastoma and fibroblastic cells were investigated by the application of Theranekron via the integrated stress signaling pathway. The SHSY-5Y and L929 cell lines were duplicated. The dose determination for Theranekron was performed with the MTT test and the IC50 value was determined as 1/10. The effective dose was administered for 24 hours within two cell lines with 90% confluence. Both cell lines were immunohistochemically stained with PERK, PKR, GCN-2 integrated stress markers. He was evaluated with Tunel for apoptosis. Statistically, there were intergroup encounters. Dec. It was found statistically significant that the antibodies used in the SHSY-5Y cancer cell line with Theranekron application increased their immunoreactivity, while this decreased in the cancer cell line that was not applied. From the point of view of L929, it was found statistically significant that these three immunoreactivity decreased in the medicated groups compared to the control L929 without drugs. In the tunnel staining, it was observed that cell death increased especially in the medicated group for the SHSY-5Y neuroblastoma cancer cell line, while cell death was low in the L929 medicated group. In other words, it turned out that theranekron Decin leads to death by increasing integrated stress molecules in cancer, but theranekron has a negligible effect on normal body cells. Accordingly, he highlighted the fact that it can be used as a drug for cancer in certain doses. Given the scarcity of studies on theranekron, we anticipate that our study may be a good reference. Keywords: Apoptosis, Integrated stress response, Cancer, PERK, Theranekron